一般是电穿孔法，适用于极难转染的细胞，如原代细胞，转染效率高，但转染后细胞死亡率也很高。

选用转染试剂与核酸结合，通过内吞作用进入细胞。一般转染试剂有以下三种：

病毒载体，转染效率高，但整合到基因组的风险大，基因长度也受限，比较适合构建稳转的细胞株。

影响细胞转染效率的因素较多，主要包括细胞生长状况、传代次数、转染试剂与质粒的比例和孵育时间、质粒大小等，其中转染试剂与质粒的比例尤为关键。

对于不同的细胞类型，转染试剂与质粒的最佳比例也不同。由于不同细胞表面结构、细胞膜、核膜等结构存在较大差异，同种转染试剂在不同细胞的转染效率也不尽相同。

因此，对于较难转染的细胞如原代细胞、神经细胞，为提高转染效率，必须对转染试剂与质粒的比例做进一步优化。

对于X-tremeGENE™系列的转染试剂，我们建议转染试剂与质粒的比例按照1:1、2:1、3:1、4:1（ul：ugDNA）四个比例进行测试，选出最优的比例，对于大多数细胞类型，3:1的比例是最合适的。

对于大多数细胞类型来说，建议在细胞密度70%-90%之间进行转染，过多或者过少都可能降低转染效率。

转染后最佳的孵育时间为18-72小时，对于大多数的细胞类型和质粒来说，最佳的孵育时间是24-48小时。

培养基中一些组分如聚阴离子会影响转染，保证培养基中无这样的组分。

稀释后DNA的量最低为100ul，过低的量会显著降低转染效率。

对于大多数细胞类型来说，建议在细胞密度70%-90%之间进行转染，过多或者过少都可能降低转染效率。

对于常规细胞来说，无血清培养基的营养成分不够，会降低细胞的存活率，虽然roche的转染试剂可以在无血清培养基中进行转染，但考虑到细胞需要血清营养成分的供给，应使用正常培养基或者减血清培养基。

应该将复合物以一滴滴缓慢加入的方式加入细胞培养基中，然后轻轻地前后和左右晃动，使复合物均匀分布。

质粒应该保证是高纯度无污染的，可以在提完质粒后或者提的最后一步，用75％乙醇沉淀，这样可以起到除菌的效果。

高表达的质粒基因产物可能会使得细胞本身生长缓慢或者存活率下降。

阳离子转染试剂浓度过高时，由于带有很强的正电荷，对细胞有一定的毒性，导致细胞形态发生变化，细胞大量死亡，所以应降低复合物的浓度或者增加细胞的浓度。