2020年版无菌检查法第二次征求意见稿

解析

阅读tips：红色划线部分为删减内容，蓝色部分为增补修订内容。

1、 培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在 2～25℃、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。

解读：密闭容器的理解，应该是无菌屏障的概念。针对临用新配的培养基，可使用非密闭容器（如传统的三角锥形瓶）；针对不即时使用的培养基，要求使用目前已经慢慢普及的密封瓶（如蓝盖螺旋密封瓶）密闭保存，且有效期需要经过企业自己的验证。对于灭菌F0≥8或者过度灭菌的培养基才有有效期验证的必要，对于115℃灭菌或者煮沸灭菌的培养基还是建议现配现用。

2、0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）的删除.

解读：这个培养基出现在硫酸链霉素和硫酸卡那霉素的各论中，采用的是直接接种法，且按照该法无法通过药典的适用性检查。故删除。

3、接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25℃培养5～7天，或直到获得丰富的孢子，加入3～5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱

解读：明确黑曲霉培养的最终目的-获得丰富的孢子，可以理解如果生长良好，培养少于5天或多于7天都是允许的，这也是考虑在实际操作过程中，孢子的生长状态受原始菌株、培养基、培养箱环境等的影响。例如小编在使用不同厂家培养基（进口和国产）培养黑曲霉时，孢子的生长状况是有很大的差别。

4、取每管适宜装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支,分别接种小于不大于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养不超过5天。逐日观察结果。

解读：在USP40中提到了面积/深度比的概念。在培养基灵敏度检查培养基接种中，取消FTM和TSB每管体积的要求，因为考虑到了目前市售的不同厂家、规格的成品培养基的情况。取消逐日观察，更符合实际操作。

5、水溶性供试液过滤前，一般应先将少量的冲洗液过滤，以润湿滤膜。

解析：预先润洗膜可使膜首先达到吸附平衡，减少对供试液的吸附。提前润洗滤膜，不要小瞧这步，有研究表明提前润洗后残留量可以相差3倍。

6、供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量一般为100ml，且总冲洗量一般不超过500ml，最高不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。

解析：去除抑菌性的常用手段，首选合适的中和剂，用了适合的中和剂可以提高方法的可重复性，USP40中的总冲洗量不超过500m。不过在《中国药典分析检测技术指南》总冲洗量还是控制在1000ml。